Shewanella, il batterio implicato nella sintesi di acidi grassi

Il microbiota enterico contribuisce alle concentrazioni di omega-3 nel tessuto dei pesci e la stessa produzione di acidi grassi omega-3 protegge i batteri dal sistema immunitario ospitante, il che fa si che i pesci d’acqua dolce con concentrazioni di omega-3 nei tessuti,  possano portare produttori batterici. Gli habitat freddi d’acqua dolce possono anche contenere batteri che producono acidi grassi omega-3, anche se è necessaria una sintesi per l’adattamento a freddo per alcune specie.

Numerosi Shewanella marini sono stati identificati come produttori di acidi grassi omega-3, inoltre studi precedenti hanno dimostrato che gli isolati Shewanella d’acqua dolce non producono acidi grassi omega-3 o ne producono livelli molto bassi. Pertanto, è possibile che i produttori non si trovino negli habitat d’acqua dolce.

In questo studio, utilizzando tecniche di selezione recentemente sviluppate, è stata isolata la Ewan-Shewanella, dai tratti gastrointestinali di cinque specie di pesci d’acqua dolce che vivono in ambienti dove vi è una temperatura di 0°C e da quattro habitat freddi di acqua dolce. Quindi, queste nicchie contengono anche i produttori di EPA.

Il ceppo Escherichia coli K-12 W3110 è stato ottenuto dal E coli Genetic Stock Centre (Yale University).

I ceppi studiati sono stati isolati durante questo studio dai tratti gastrointestinali dei pesci d’acqua dolce forniti da Douglas Borys (Concordia University Wisconsin), dal Programma di pesca e valutazione inter-tribali o dal Dipartimento di Risorse Naturali di Wisconsin. I campioni d’acqua provenivano dal Lago Michigan (WI), da Horicon Marsh (WI) o da Wild Rose Fish Hatchery (WI). I campioni di sedimenti sono stati prelevati invece dal Lago Michigan (WI). Isolamento dei batteri produttori di acido grasso omega-3.

Per questo studio sono stati raccolti tratti gastrointestinali dalla trota di lago (Salvelinus namaycush) in Canada. I tratti gastrointestinali del salmone di cocco (Oncorhynchus kisutch) e delle trote marrone (Salmo trutta) sono stati forniti dal Dipartimento delle Risorse Naturali di Wisconsin. Dopo 1 o 2 giorni di crescita nel brodo di soia a 15 ° C, le colonie rosse sono state raccolte come batteri produttori omega-3, ricchi di benefici.

Successivamente la colorazione Gram è stata effettuata su produttori omega-3 utilizzando un kit di colorazione Gram (BD) utilizzando le cellule coltivate in TSB a 15°C. I campioni sono stati coltivati ​​a 10 ° C sul terreno per lo screening e l’analisi iniziali. Il ceppo E. coli W3110 è stato coltivato a  a 25°C come controllo negativo.

Inoltre, i campioni sono stati coltivati ​​su piastre di agar alla stessa temperatura fino a quando le colonie di media grandezza si sono formate a 10 ° C, in seguito le colonie sono state tolte dall’aria di coltivazione, lavate e brevemente essiccate. Gli esteri metilici dell’acido grasso (FAME) sono stati generati da un protocollo di metilazione dell’acido metanolo.

Salmone, noci, semi e olio sono cibi contenenti Omega 3

I ceppi batterici sono stati sospesi in 1 ml di una soluzione HCl in metanolo e risospesi a un volume finale di 4 ml di una soluzione HCl-metanolo. Le sospensioni sono state riscaldate a 80 ° C per 60 minuti in flaconi di vetro sigillati.

Dopo che le sospensioni sono state raffreddate e sono stati aggiunti 4 ml di esano, i campioni sono stati vorticati vigorosamente in tubi conici da 15 ml di vetro. I campioni sono stati poi centrifugati a 1000 x g per 10 minuti utilizzando un rotore a scatto in una centrifuga.  Lo strato di esano è stato rimosso, mantenuto come descritto sopra e evaporato con gas azoto.

Gli estratti secchi sono stati risospesi in 300 ml di esano. Tre microgrammi di un estere metilico dell’acido pentacosanoico (Cayman Chemical) è stato aggiunto come standard interno ad alcuni campioni e per altri campioni sono stati aggiunti 3 mg di acido pentacosanoico (Cayman Chemical) prima della fase di metilazione per valutare l’efficacia della metilazione.

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